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本试剂盒主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H2O2)含量。

是H2O2与硫酸钛反应生成的过氧化物-钛复合物黄色沉淀，溶解于强酸中，其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系，可通过比色法检测412nm处吸光度。

过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解，H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成，H2O2相对超氧阴离子性质稳定，但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害，加速细胞的衰老和解体，H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

• 蒸馏水、丙酮
  
• 匀浆器或研钵、低温离心机、分光光度计、比色杯

• 该试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增加。
  
• 加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加入至溶液中，不要粘到管壁。
  
• 过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间，需完全溶解，否则有可能影响测定结果。
  
• H2O2基液和碱性基液应严格密闭保存，避免挥发，否则效率会下降。
  
• H2O2基液和酸性基液有一定腐蚀性，请小心操作。
  
• 硫酸钛溶解于水后应尽早使用，如暂时不用，可短期放置4℃冰箱保存；亦可用分析天平称取一定量的粉剂，配置5%的浓度即可。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  
• 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。

• 准备样品
  
  • 植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取5g，加入5mL预冷的丙酮，在冰浴条件下迅速匀浆或研磨，离心20min，收集上清液，测量提取液总体积，4℃保存备用。
    
  • 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，4℃保存，用于过氧化氢的检测。
    
  • 高活性样品：如果样品中含有较高浓度的过氧化氢，可以使用丙酮进行恰当的稀释。
• 配制10mM H2O2标准溶液：由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度，该试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M，用蒸馏水稀释100倍，使H2O2浓度约为10mM，蒸馏水调零，分光光度计测定A240，根据公式H2O2浓度(mM)=22.94×A240计算出H2O2基液中H2O2的实际浓度，再用丙酮稀释H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮标准溶液(一般情况下新配制的10mM H2O2基液A240为0.4~0.45，3个月以后A240为0.35~0.42)。
  按下表依次稀释(常用浓度0.3～3mM，即1～5号)：
  

  加入物(mL)	1	2	3	4	5	6	7
  丙酮-H2O2标准(10mM)	0.03	0.05	0.08	0.1	0.3	0.5	0.8
  预冷丙酮	0.97	0.95	0.92	0.9	0.7	0.5	0.2
  H2O2浓度(mM)	0.3	0.5	0.8	1	3	5	8

• 配制硫酸钛溶液：0.3g硫酸钛加入6mL蒸馏水中，即为5%硫酸钛溶液，4℃保存。
  
• H2O2加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的H2O2浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  预冷丙酮	1	—	—
  系列丙酮-H2O2标准(1～7号)	—	1	—
  待测样品	—	—	1
  碱性基液(直接加入到溶液)	0.2	0.2	0.2
  硫酸钛溶液(直接加入到溶液)	0.1	0.1	0.1
  加入碱性基液、硫酸钛溶液时，应直接加至溶液中，不要粘到管壁。

• H2O2测定：混匀，室温放置5min，离心15min，弃上清液，留取沉淀，如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物，向各管的沉淀中加入2mL酸性基液，摇动，使沉淀完全溶解；比色杯光径1cm，空白管调零，分光光度计测定412nm处各标准管、测定管的吸光度，如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测。